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預固定不動難題
染色前固定不動體細胞對流式的結果危害極大
大家一般由于下列幾類緣故采用先向體細胞固定不動,隨后開展流式的試驗:便捷(許多 試驗一天沒法做了)、安全性(有生物毒性的樣版務必固定不動殺掉體細胞后開展試驗)及其胞內染色。殊不知固定不動會更改蛋白的表位,導致結果不精i確,乃至不正確。大家查看材料發(fā)覺Biolegend企業(yè)干了很多的試驗,較為了不固定不動和固定不動(4%多聚甲醛)對流式的染色結果的危害。
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1.配備0.2M的PB水溶液(含磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉),而不是0.1M的PB水溶液;
2.稱量需求量的多聚甲醛(例如20克),殺蟲劑多聚甲醛廠家,并倒進1L容積的三角燒瓶中,隨后倒進需求量的0.2MPB水溶液(例如250毫升),再添加適量的純水;
3.在量杯中放進電機轉子,并且用100ml量杯蓋在1L三角燒瓶上避免 多聚甲醛蒸發(fā),隨后一同放進磁力攪拌爐上加溫(此一部分應在通風柜內進行);
4.待多聚甲醛剛開始溶化的情況下,消毒劑多聚甲醛廠家,意味著溫度早已貼近70℃,必須時刻檢測(超出70℃可根據添加一定量的純水來減少溫度);
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在免i疫染色試驗中,假如能用的抗i體應用實際效果均不佳,有三種方法能夠使之改進。
先提議使用所述二種固定不動方法,由于這二種方法的固定不動體制存有非常大差別。抗i體在一種固定不動方法中檢驗實際效果不理想化,有可能在另一種固定不動方法中工作中優(yōu)良。第二個解決困難的方法是減少固定不動液的濃度值,用系列產品稀釋液的固定不動液開展實驗。多聚甲醛廠家
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下邊挑選的方法盡管簡易,殺菌劑多聚甲醛廠家,但在十分較低濃度的固定不動液的狀況下,仍能做到優(yōu)良的固定不動實際效果。第三種方法是依據固定不動方法來制取抗i體,先將抗原用固定不動液固定不動后,寧德多聚甲醛廠家,再去免i疫力小動物造成抗i體。在這類狀況下,常用抗原將和試驗中固定不動后的抗原十分類似,可以得到 融合固定不動抗原的抗i體。多聚甲醛廠家
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